Πώς να διαχωρίσετε την ανασυνδυασμένη εντεροκινάση και την πρωτεΐνη στόχευσης;

March 8, 2022

Η σχεδιασμένη Ανασυνδυασμένη Εντεροκινάση μπορεί να κόψει ειδικά την ανασυνδυασμένη πρωτεΐνη σύντηξης, συμπεριλαμβανομένων δύο τύπων: ο ένας είναι REK-B, δεν περιέχει ετικέτα, μια φυσική αλληλουχία ελαφριάς αλυσίδας εντεροκινάσης βοοειδών.ένα άλλο είναι το REK-H, περιέχει 6×His tag.

Το Yaxinbio μπορεί να παρέχει ειδικά REK-B χωρίς ετικέτα, με υψηλότερη ειδική δραστηριότητα περίπου 10000 Unit/mg pro.Σύμφωνα με τον ορισμό της δραστηριότητας, 1 μονάδα ανασυνδυασμένης εντεροκινάσης μπορεί να κόψει 0,5 mg στοχευόμενης πρωτεΐνης, η περιεκτικότητα της ανασυνδυασμένης εντεροκινάσης στο διάλυμα πέψης είναι δέκα χιλιοστά (0,01%).Ως εκ τούτου, είναι πολύ χαμηλό και δεν είναι απαραίτητο να ληφθεί υπόψη ο αντίκτυπος του REK στα κατάντη αποτελέσματα.Δεν συνιστάται ο ειδικός διαχωρισμός του REK από το διάλυμα πέψης.

 

Εάν χρειάζεται να αφαιρέσετε το REK, συνιστάται η μέθοδος αφαίρεσης ως εξής:

1) Συνιστάται γέλη συγγένειας με αναστολέα τρυψίνης.Καθώς η ανασυνδυασμένη εντεροκινάση είναι μια πρωτεάση σερίνης, ο αναστολέας θρυψίνης μπορεί να συνδυαστεί με την εντεροκινάση έτσι ώστε να επιτευχθεί ο σκοπός καθαρισμού.

2) Προτείνεται επίσης η χρήση χρωματογραφίας ανταλλαγής ιόντων για την αφαίρεση μικρής ποσότητας ανασυνδυασμένης εντεροκινάσης.

Σε pH 8,0, η ανασυνδυασμένη εντεροκινάση μπορεί να συνδυαστεί με γέλη DEAE και στη συνέχεια μπορεί να εκλουσθεί με 0,15 Μ NaCl.